|
|
Izolace DNA z probiotických druhů baktérií mléčného kvašení v potravinových doplňcích
Tvrdíková, Jana ; Vojtíšková, Marie (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
V této práci byly testovány magnetické nosiče funkcionalizované streptavidinem při selektivní izolaci DNA. Metoda selektivní izolace DNA byla testována s využitím DNA probiotického kmene Lactobacillus paracasei subsp. paracasei CCDM 211/06. Na nosiče s navázaným streptavidinem byl imobilizován biotinylovaný oligonukleotid a využit jako DNA sonda pro izolaci komplementárního řetězce DNA pomocí DNA/DNA hybridizace. Jako DNA sonda byl testován primer R 5´ bio a biotinylovaný denaturovaný PCR produkt specifický pro druh Lb. paracasei. Byly optimalizovány následující experimentální podmínky selektivní izolace DNA: teplota a doba hybridizace, množství DNA, eluce DNA z mikročástic. Izolace DNA byla ověřena pomocí PCR s rodově specifickými primery. Byl amplifikován rodově specifický PCR produkt o velikosti 250 bp, který byl prokázán pomocí gelové elektroforézy na agaróze. Použitý postup byl úspěšně použit při selektivní izolaci DNA Lactobacillus z komplexního vzorku doplňku stravy (BIFI pangamin).
|
|
|
Izolace bakteriální DNA z potravin s využitím magnetických nosičů
Bubeníková, Lucia ; Horák, Daniel (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
Práce byla zaměřena na selektivní izolaci bakteriální DNA pomocí magnetických nosičů se streptavidinem (PGMA-NH2-STV, MPG® Streptavidin). Byly optimalizovány podmínky funkcionalizace nosičů dvěma biotinylovanými sondami: množství nosiče, množství sondy, vazba biotinylové sondy na streptavidin. Pro hybridizaci byla použita purifikovaná DNA Lactobacillus. Byla testována vazba DNA na sondu (DNA/DNA hybridizace) a nespecifická vazba DNA na částice. Cílová DNA, eluovaná z nosiče, byla identifikována pomocí PCR s primery R16-1 a LbLMA1-rev a s primery P_eub a F_eub. Množství sondy navázané na nosič bylo stanoveno spektrofotometricky. Bylo zjištěno, že k funkcionalizaci lze použít biotinylovanou sondu o koncentraci 5 pmol/µl, přidávanou k nosiči v poměru nosič:sonda 1:1. Bylo ukázáno, že nespecifická adsorpce DNA na nosič MPG® Streptavidin je výrazně menší než na nosič PGMA-NH2-STV. DNA/DNA hybridizací s využitím nosiče MPG® Streptavidin byla izolována DNA z čisté kultury Lactobacillus. Postup byl aplikován na izolaci DNA z mléčných výrobků.
|
|
|
Izolace bakteriální DNA z potravin s využitím magnetických nosičů
Bubeníková, Lucia ; Horák, Daniel (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
Práce byla zaměřena na selektivní izolaci bakteriální DNA pomocí magnetických nosičů se streptavidinem (PGMA-NH2-STV, MPG® Streptavidin). Byly optimalizovány podmínky funkcionalizace nosičů dvěma biotinylovanými sondami: množství nosiče, množství sondy, vazba biotinylové sondy na streptavidin. Pro hybridizaci byla použita purifikovaná DNA Lactobacillus. Byla testována vazba DNA na sondu (DNA/DNA hybridizace) a nespecifická vazba DNA na částice. Cílová DNA, eluovaná z nosiče, byla identifikována pomocí PCR s primery R16-1 a LbLMA1-rev a s primery P_eub a F_eub. Množství sondy navázané na nosič bylo stanoveno spektrofotometricky. Bylo zjištěno, že k funkcionalizaci lze použít biotinylovanou sondu o koncentraci 5 pmol/µl, přidávanou k nosiči v poměru nosič:sonda 1:1. Bylo ukázáno, že nespecifická adsorpce DNA na nosič MPG® Streptavidin je výrazně menší než na nosič PGMA-NH2-STV. DNA/DNA hybridizací s využitím nosiče MPG® Streptavidin byla izolována DNA z čisté kultury Lactobacillus. Postup byl aplikován na izolaci DNA z mléčných výrobků.
|
|
|
Izolace DNA z probiotických druhů baktérií mléčného kvašení v potravinových doplňcích
Tvrdíková, Jana ; Vojtíšková, Marie (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
V této práci byly testovány magnetické nosiče funkcionalizované streptavidinem při selektivní izolaci DNA. Metoda selektivní izolace DNA byla testována s využitím DNA probiotického kmene Lactobacillus paracasei subsp. paracasei CCDM 211/06. Na nosiče s navázaným streptavidinem byl imobilizován biotinylovaný oligonukleotid a využit jako DNA sonda pro izolaci komplementárního řetězce DNA pomocí DNA/DNA hybridizace. Jako DNA sonda byl testován primer R 5´ bio a biotinylovaný denaturovaný PCR produkt specifický pro druh Lb. paracasei. Byly optimalizovány následující experimentální podmínky selektivní izolace DNA: teplota a doba hybridizace, množství DNA, eluce DNA z mikročástic. Izolace DNA byla ověřena pomocí PCR s rodově specifickými primery. Byl amplifikován rodově specifický PCR produkt o velikosti 250 bp, který byl prokázán pomocí gelové elektroforézy na agaróze. Použitý postup byl úspěšně použit při selektivní izolaci DNA Lactobacillus z komplexního vzorku doplňku stravy (BIFI pangamin).
|
host ::
RSS.